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      pcr實驗室

      pcr實驗室

      簡短介紹:PCR實驗室設計方案 3.1試劑存和準備區 3、實驗室空調通風系統設計及壓力控制PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。 該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求。 3.2標本制備區 該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸DA提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DA時DNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。 3.3擴增反應混合物配制和擴增區該區域主要進行的操作為DA或CDA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的CDA(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開反應管,因此巢式擴増有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進行。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。 3.4擴增產物分析區 該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。 4、污染的預防與控制 PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。
      pcr實驗室

      一、設計要求

      根據《病原微生物實驗室生物安全管理條例》、《實驗室生物安全通用要求》、《生物安全實驗室建筑技術規范》等文件,為本方案設計依據。

      1、概述

      臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗,是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內所含的基因進行擴增的方法,測出一些病毒含量不高的感染者體內是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測岀的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優點,因此被臨床醫生廣為認可,已廣泛應用于醫院的臨床診斷和各防疫檢測部的禽疫病診斷。但是,這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規范的操作為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視,因為它對檢測結果的可靠性、準確性和安全性起到至關重要的作用。本設計方案主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局,空調通風系統設計、氣流控制和污染的防制幾個方面對實驗室設計中的主要特點進行了闡述。臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核心問題是如何避免污染。因此,實驗室的平面布局、空調通風系統設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。

      2、PCR實驗室平面布局臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產物分析區。各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。

      PCR實驗室設計方案

      3.1試劑存和準備區

      3、實驗室空調通風系統設計及壓力控制PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。

      該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求。

      3.2標本制備區

      該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸DA提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DA時DNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。

      3.3擴增反應混合物配制和擴增區該區域主要進行的操作為DA或CDA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的CDA(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開反應管,因此巢式擴増有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進行。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。

      3.4擴增產物分析區

      該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。

      4、污染的預防與控制

      PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。

      4.1工作區域的嚴格劃分

      (1)各個實驗區域設置合理

      (2)各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面鱖色等),以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。

      4.2合理的系統設置

      (1)合理的空調通風系統設置,盡量釆用全送全排的空調系統;

      2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。

      4.3規范的操作

      (1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓冾格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作

      2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;

      (3)清潔工作及時、正確。實驗工作結朿后,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表面進行摽拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。

      4.4嚴格的管理

      (1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門

      (2)在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域;

      (3)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。

      4)擴增產物分析區是最主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等

      5)擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。

      4.5完備的實驗室配套設施

      完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。

      1.PCR實驗室實施設備

      序號

      儀器名稱

      基本技術性能要求

      數量

      1

      實時熒光PCR

      4通道及以上,96

      1

      2

      全自動核酸提取儀

      一次可以提取1-32份標本,30分鐘左右完成提取

      1

      3

      生物安全柜

      A2

      2

      4

      全自動高壓滅菌器

      1

      5

      高速臺式離心機

      24孔,2Ml,最高轉速12000/

      1

      6

      高速臺式冷凍離心機

      24孔,2Ml,最高轉速12000/

      1

      7

      迷你離心機

      8-12孔,2Ml,最高轉速12000/

      2

      8

      迷你離心機

      8聯管和12聯管,0.2Ml

      2

      9

      旋渦振蕩器

      2

      10

      移液器

      15把(0.5-10uL,2-20uL,20-200uL,100-1000uL,10-100uL)

      4

      11

      醫用冰箱

      具有冷藏和冷凍室(250L以上)

      2

      12

      超低溫冰箱

      -70℃,250L以上

      1

      13

      恒溫水浴箱

      20L ,精度±0.5

      1


      我公司是一家專業從事于實驗室前期建筑咨詢,系統規劃設計、施工、實驗室家具設計制作的股份制有限公司。作為實驗室建設行業的專業者,我們致力于引進國際上先進的實驗室技術,并予以吸收國產化,先后推出了歐式,美式實驗臺,VAV變風量控制系統,實驗室智能化系統,由此獲得廣大客戶的認可。


      二、設計方案

      1、主體結構

      主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金50內圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結構牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。標準的四個區分隔和氣壓調節將PCR過程分成試劑準備、標本制備、PCR擴增和產物分析四個獨立的實驗區。整個區域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區設置有緩沖區,同時各區通過氣壓調節,使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環境的污染?纱蜷_緩沖區I,緩沖區Ⅱ和PR擴增區的排風扇往外排氣,在實驗區的外墻上稻各扇門上都安裝有風量可調的回風口,空氣通過回風口向室內換氣。

      序號

      項目名稱

      建筑面積

      儀器設備

      環境要求

      備注

      1

      試劑配制室

      2535

      生物安全柜,離心機,混勻器,移液器,冰箱

      宜微正壓

      1適用于有一定生物安全隱患的實驗;

      2實驗流向、氣流、人流、物流均為單向流

      2

      樣品處理室

      2030

      生物安全柜,核酸提取儀,離心機,混勻器,移液器,冰箱

      宜為BSL-2或以上等級實驗室

      3

      核酸擴增室

      2030

      實時熒光PCR儀,打印機

      壓強不高于樣品處理室,局部5級凈化

      4

      產物分析室

      2030

      電泳儀,凝膠成像系統

      壓強低于核酸擴增室

      表2.PCR實驗室環境要求與設施設備

      2、消毒

      在四個實驗區和四個緩沖區頂部以人及傳送窗內音安裝有紫外燈,供消毒用。在試劑準備區和標本制備區還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。

      3、機械連鎖不銹鋼傳遞窗

      4、試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。

      5、地面地面使用PVC卷材地面,基層地面做自流坪處理,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。

      6、照明

      燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。在建設的過程中應注意:

      (1)規范的安裝流程和全面的服務流程。

      2)嚴格按照規范科學設計的安裝流程。

      3)安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進線位置,電話網絡線進線位置,進水水壓,最小安裝空間,地面平整度,通風孔、進水管和下水管的位置等,理想狀態的空間尺寸和通風口尺寸。



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